HBV-pgRNA 核苷类药物抗病毒治疗的疗效监测及停药预测有效指标

北京热景生物技术股份有限公司
慢性乙型病毒性肝炎影响着全球超过2.5亿人口,每年约有65万人死于HBV相关终末期肝病。HBV前基因组RNA(pregenomic RNA,简称HBV-pgRNA),由感染肝细胞核内的共价闭合环状DNA(cccDNA)转录产生,HBV-pgRNA的存在及水平能够反映cccDNA的存在水平及其转录活性状态。
HBV的感染与复制
如图所示,HBV感染肝细胞始于病毒颗粒表面L蛋白被肝细胞表面钠-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)受体识别并结合,可能以内吞形式进入细胞。在胞浆中释放出核衣壳,核衣壳在核心蛋白核定位信号的作用下,进入胞核,并释放出RC-DNA,并最终形成cccDNA。cccDNA与核小体结合形成独立于细胞染色体外的微小染色体结构,这一过程有赖于HBx和核心蛋白的参与。cccDNA是病毒转录的模板,其利用宿主细胞的RNA聚合酶进行转录,可产生3种亚基因组RNA,用于合成病毒蛋白,以及2种长于基因组的RNA,用于病毒复制、转译核壳等。有效的cccDNA转录受到肝脏特异性转录因子及HBx的调控。 在细胞浆中,pgRNA和病毒P蛋白一起被新形成的核壳蛋白包裹,在此以pgRNA为模板,逆转录形成负链,随后pgRNA降解,正链合成,新的RC-DNA形成。含有RC-DNA的成熟核心颗粒包裹外膜蛋白,在细胞多泡体的参与下分泌出细胞,此外,新生的成熟核心颗粒还可以再次入核,扩充细胞的cccDNA池。
目前,核苷和核苷酸类药物(NAs)广泛用于治疗慢性乙型肝炎(CHB),主要通过抑制病毒的逆转录和DNA合成发挥抗病毒作用,由于NAs不能清除肝细胞核内的cccDNA,且cccDNA的存在水平及其转录活性状态是导致临床上CHB患者抗病毒治疗难以实现临床治愈,停药后发生病毒学反弹和疾病复发的主要原因。cccDNA的检测需要进行肝穿刺,会对人体造成较大损伤。因此,血清或血浆中HBV-pgRNA水平的检测对乙型肝炎病毒(HBV)感染的辅助诊断和慢性乙型肝炎(CHB)的NAs抗病毒治疗的疗效监测及停药预测有着重要意义。
热景生物乙型肝炎病毒pgRNA(HBV-pgRNA)测定试剂盒采用实时荧光定量PCR技术,用于定量测定临床血清或血浆标本中的HBV-pgRNA。针对HBV-pgRNA的保守区域,设计一组针对HBV-pgRNA的特异性引物和荧光探针,与RT-PCR反应缓冲液,Taq酶,逆转录酶等共同配制成RT-PCR反应液,在实时荧光定量PCR仪上进行一步法RT-PCR扩增,实现对血清或血浆样本中HBV-pgRNA的定量检测(联系人:徐先生13810318364)。
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